本方法適用于配合飼料、濃縮飼料、復合預混料飼料、維生素預混合飼料維生素A及維生素D、維生素E的測定。參考標準
1、方法原理
維生素預混料中的維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)用甲醇溶液提取,試液注入液相色譜柱,用紫外檢測器在275 nm處測定,外標法計算維生素A、維生素D3、維生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)含量。
2、主要儀器設備
1)液相色譜儀L210,帶紫外檢測器(上海儀電分析儀器有限公司);
2波水??;
3)電子天平;
4)真空抽濾裝置。
3、實驗方法
1、混合標樣配置
維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E標準貯備液:準確稱取維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E)各10.0 mg,置于100 mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋到刻度,混勻,4℃下保存。該貯備液濃度為0.1 mg/mL。
維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E(混合標準工作液:準確吸取各標準貯備液若干毫升于10 mL棕色容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,混勻。
2、試樣溶液的制備
稱取試樣1.00 g置于100 mL棕色容量瓶中,加入約80 mL甲醇,于 65 ℃波水浴中提取30 min,冷卻至室溫,用甲醇稀釋至刻度,充分搖勻后過0.45 μm濾膜過濾。將試樣溶液進一步稀釋至合適濃度,用于實驗分析。
3、液相色譜儀參考條件
色譜柱:C18 4.6 mm(i.d)×150mm;
流動相:95%甲醇
流速:1 mL/min;
柱溫:室溫
波長:275 nm;
測定:取相同體積試樣制備液和標準使用液分別注入相色譜儀,根據保留時間按定性,外標峰面積法定量。
4、實驗結果
1.維生素A乙酸酯 2.維生素D3 3.維生素E
4.2工作曲線的繪制
維生素A乙酸酯工作曲線見下圖,線性相關系數:0.9998
維生素D3工作曲線見下圖,線性相關系數:0.9998
維生素E工作曲線見下圖,線性相關系數:0.9992
4.3預混料實際樣品色譜圖